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Lorsque les chercheurs découvrent des avancées scientifiques à l'aide de la chimie analytique, il est important de disposer du bon équipement pour obtenir des résultats fiables. Les tests par HPLC nécessitent un équipement spécialisé compatible avec votre analyte. Pour déterminer l'équipement chimique nécessaire à votre laboratoire d'analyse, vous devez d'abord confirmer votre méthodologie en fonction de la composition de votre échantillon. Les techniques de HPLC peuvent être affinées pour répondre à vos besoins spécifiques, et une connaissance approfondie de la chromatographie vous permettra de développer un flux de travail fiable.
La chromatographie en phase liquide à haute performance (HPLC) est une technique analytique utile pour les composés chimiques tels que les petites molécules et les biopolymères. Cette technique consiste à étudier un échantillon qui est dissous dans une solution, laquelle est ensuite injectée dans une colonne contenant une résine qui interagira avec l'échantillon. Cette interaction ralentit le mouvement de l'échantillon dans la colonne, où il est ensuite détecté. Les données sont dérivées de la synchronisation du mouvement de l'échantillon et de l'intensité de la détection de l'échantillon. Pour en savoir plus sur l'utilisation de la HPLC, consultez notre page sur nos solutions de chromatographie. Avantor offre une large sélection de ressources et de produits pour répondre à vos besoins. Chromatographie en phase liquide à haute performance En termes simples, la chromatographie liquide à haute performance repose sur le principe selon lequel les composés individuels se comportent différemment dans l'eau. La HPLC sépare et purifie les composés en fonction de leur polarité ou de leurs propriétés hydrophobes/hydrophiles. Il existe deux types de chromatographie : en phase normale et en phase inverse. Les différentes compositions de résine dans la colonne déterminent le type de chromatographie utilisé et les molécules qui peuvent être séparées. Phase normale Dans cette méthode, la colonne est remplie de particules de silice polaires et d'un tampon non polaire. Une fois l'échantillon injecté, les particules polaires adhèrent à la silice et présentent un temps de rétention plus long que les molécules non polaires. Phase inversée La colonne est remplie de particules hydrophobes avec un tampon polaire lors de la réalisation d’une chromatographie en phase inverse. Les molécules hydrophobes adhèrent plus longtemps à la résine et peuvent être détectées plus facilement. Utilisation de produits chimiques pour la préparation d'échantillons en laboratoire La préparation d'un échantillon en vue d'un test par HPLC comporte trois processus principaux : la dilution, la centrifugation et la filtration. Chaque étape nécessite des produits chimiques différents qui, lorsqu'ils sont planifiés correctement, permettent de minimiser les dépenses et d'optimiser votre protocole. Il est essentiel de sélectionner les produits chimiques appropriés pour la préparation des échantillons, car cela peut aider à économiser du temps, de l'argent et des ressources dans votre laboratoire. La dilution La clé d'une bonne dilution d'un échantillon est de déterminer les produits chimiques qui fonctionnent le mieux pour le métabolite qui vous intéresse. Un solvant peut favoriser une classe chimique tout en perdant ou en diminuant une autre classe. L'eau et d'autres solvants sont couramment utilisés dans ce cas. Par exemple, des solvants organiques comme le méthanol ou l'acétonitrile sont utilisés simultanément pour broyer les protéines et extraire de petites molécules. La centrifugation Cette étape permet de préserver votre équipement d'essai tout en protégeant la qualité de votre échantillon pendant la filtration. La centrifugation consiste à faire tomber toutes les particules en suspension au fond du tube d'échantillon et à agiter vigoureusement la solution pour la mélanger. Il est recommandé de mélanger un échantillon pendant 5 minutes à vitesse maximale à l'aide d'une centrifugeuse de paillasse. Cela permet de minimiser le gaspillage lors de la récupération d’échantillons filtrés et de réduire l'utilisation de produits de filtration coûteux qui nécessitent souvent des durées de filtrage plus longues. Bien que la centrifugation ne nécessite pas de produits chimiques supplémentaires, elle réduit considérablement la quantité nécessaire aux autres étapes. La filtration Un laboratoire d'analyse peut traiter des centaines d'échantillons chaque semaine, ce qui nécessite des résultats rapides et précis. Cet équilibre entre rythme et qualité est profondément influencé par les techniques de filtration. La filtration est importante pour une bonne préparation des échantillons HPLC pour deux raisons principales : protéger la pompe des particules présentes dans le solvant et empêcher les particules de boucher et d'endommager la colonne HPLC. L'utilisation de solvants pré-mélangés et filtrés permet de minimiser le risque de contamination par le solvant. Ce niveau de pureté contribuera à réduire l'entretien de votre équipement. L'ajout d'une étape de filtration avant le chargement de l'échantillon dans la colonne ou au point de collecte peut réduire les erreurs dues à la contamination et protéger votre équipement de l'usure à long terme. Choix des produits chimiques pour la préparation d'échantillons en HPLC Lors de la mise en place d'une technique efficace de préparation d'échantillons en HPLC, il est essentiel de se procurer des produits chimiques purifiés et présentant les réactions nécessaires avec vos composés cibles. Des solvants tels que l'acétonitrile, le méthanol et l'eau sont souvent utilisés dans la préparation d’échantillons, à des fins de filtration. Certains des meilleurs solvants pour l'analyse HPLC font l'objet d'un contrôle de qualité pour la transparence UV afin de garantir une sensibilité optimale et sont débarrassés des impuretés métalliques qui affectent souvent l'activité biologique de votre échantillon. Disposer des produits chimiques de filtration appropriés permet d'accélérer les tests et souvent d'éliminer l'équipement et les ressources supplémentaires utilisés pour filtrer davantage un échantillon susceptible d'être contaminé. Choix des solvants pour éviter la contamination Le choix des bonnes solutions chimiques peut être déterminant pour éviter la présence de contaminants dans votre échantillon HPLC. Ceux-ci fausseraient les résultats des tests et endommageraient votre équipement. Les substances extractibles sont des composés libérés par un composant, tel qu'une membrane filtrante, qui est en contact avec le solvant de l'échantillon. La quantité de substances extractibles varie en fonction de la résistance aux solvants du composant, ainsi que des températures et des pressions impliquées. Les substances extractibles peuvent affecter la précision de la HPLC en interférant avec l'analyse si elles sont détectables par la méthode d'analyse en aval. Ces composés introduisent des données parasites, ce qui réduit la qualité globale des données. Cela peut être particulièrement problématique lorsque l'analyte cible a le même temps de rétention que l'extractibilité. La confirmation que la membrane de filtration présente une compatibilité chimique élevée avec les solvants de la phase mobile peut réduire de manière significative les substances extractibles. Les membranes en polytétrafluoroéthylène (PTFE), en polyfluorure de vinylidène (PVDF) et en cellulose régénérative (RC) sont des choix populaires, car elles sont très compatibles avec les solvants courants de la phase mobile. L'eau purifiée, l'acétonitrile et le méthanol sont des solvants couramment utilisés. Un autre moyen de prévenir la contamination consiste à réduire la variation des matériaux dans le laboratoire. La standardisation de deux types de membranes et leur utilisation dans différents formats favoriseront la cohérence au sein du laboratoire. Vous pouvez utiliser les mêmes matériaux membranaires dans des cercles membranaires pour la filtration de la phase mobile, des filtres à seringue pour la préparation manuelle et des filtres sans seringue pour la filtration automatisée. Cela signifiera une diminution du nombre de consommables qui doivent être stockés, ce qui minimise l'espace nécessaire et les tracas liés au réapprovisionnement d'une grande liste de fournitures. En savoir plus sur l’équipement de HPLC et toutes les ressources de tests analytiques par l'intermédiaire d'Avantor®. Conclusion La recherche d'équipements chimiques HPLC pour le traitement à grande échelle ou la recherche de pointe devrait être simplifiée. Avantor® fournit des produits de haute qualité et des outils de référence pour contribuer à la réussite de votre laboratoire. La manipulation correcte des produits chimiques de laboratoire pour la HPLC est également une considération importante lors de l'approvisionnement en équipement et du maintien du contrôle de la qualité. Pour plus d'informations sur la manipulation des produits chimiques de laboratoire courants, consultez notre page consacrée aux produits chimiques de laboratoire et à leurs utilisations. Pour tous vos besoins en équipements chimiques, Avantor® s'occupe de vous. |
