07541
STMC07541EA
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STMC07541
Cellules souches mésenchymateuses humaines qPCR Array
Tests
Tests à l'acide nucléique
Pour la caractérisation des CSM humaines et leur différenciation vers des lignées chondrogéniques, adipogéniques ou ostéogéniques.
La matrice de réaction en chaîne de la polymérase quantitative (qPCR) des cellules souches mésenchymateuses humaines est conçue pour la caractérisation des cellules souches et progénitrices mésenchymateuses humaines (CSM) et de leur progéniture différenciée chondrogène, adipogène ou ostéogène. Les CSM sont des précurseurs multipotents auto-renouvelables que l'on trouve dans la fraction adhérente de la moelle osseuse et dans les compartiments stromaux de nombreux tissus. Les CSM peuvent être étendues in vitro pour générer des cultures de cellules stromales mésenchymateuses qui, dans des conditions appropriées, peuvent se différencier en adipocytes, chondrocytes et ostéoblastes. Cette matrice qPCR fournit le profil d'expression génique des CSM et de leurs dérivés trilinéaires après une différenciation in vitro. Les gènes ont été sélectionnés sur la base de leur expression différentielle démontrée dans les CSM (Silva et al.) ou dans les cellules chondrogéniques dérivées des CSM (Herlofsen et al. ; Yoo et al.), adipogéniques (Hung et al. ; Menssen et al.) ou ostéogéniques (Kulterer et al.).
La qPCR est utilisée pour déterminer les changements dans les niveaux d'ARNm à l'état d'équilibre de l'expression des gènes dans plusieurs échantillons, généralement normalisés par rapport à l'expression relative des gènes de contrôle internes. Des amorces spécifiques aux gènes amplifient les séquences cibles dans les pools d'ADNc retranscrits à partir de l'ARNm et, comme avec la technologie TaqMan®, des sondes hybridées spécifiques aux séquences fournissent un signal fluorescent provenant de l'activité exonucléasique 5' de l'ADN polymérase Taq.
Le taux d'accumulation du signal fluorescent est utilisé pour quantifier l'ADNc de l'échantillon, et donc la quantité d'ARNm dans le lysat cellulaire d'origine.
Cette matrice qPCR contient des amorces et des sondes validées pour la détection de 90 gènes dont l'expression est corrélée avec les CSM ou leurs dérivés différenciés, ainsi que six gènes de contrôle endogènes (housekeeping).
Le modèle de contrôle qPCR TBP (TATA box-binding protein) est fourni comme contrôle positif d'ADN synthétique.
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